Elementos necesarios:
- Placas de petri con medio de cultivo
- Lazo de siembra
- Mechero
- Film transparente para sellar las placas de petri
- Muestra de la levadura a cultivar
Los pasos serían:
- Atemperar las placas con medio de cultivo y muestras de levadura
- Limpiar área de trabajo y encender mechero
- Esterilizar el lazo de siembra, enfriarlo y tomar una muestra
- Sembrar la muestra en la placa
- Cultivar la siembra en la placa durante 3 días a temperatura ambiente para que se desarrollen colonias
- Sellar las placas y almacenar en heladera hasta su uso
- Preparar las placas que se vayan a sembrar con agar y dejarlas reposar hasta que tomen temperatura ambiente. Mantener la placa con el agar boca abajo y cerca del mechero.
- También dejar la muestra de levadura que se desee replicar a que tome temperatura ambiente. En este caso replico desde viales de White Labs, pero puede ser desde barro del fermentador (preferentemente lavado), fondo de una botella, starter de leva en polvo o lo que se les ocurra..
- Limpiar el área de trabajo y encender el mechero. El mechero tiene dos propósitos: primero proveer fuente de calor para esterilizar el lazo de siembra y segundo crear un flujo de aire caliente ascendente que arrastra cualquier tipo de bacteria en suspención. Se trabaja en las cercanías del mechero para aprovechar esta convección que crea un área de trabajo segura.
Con una mano se maneja el lazo de siembra y con la otra se trabaja con el recipiente que contiene la levadura y la placa de petri.
- Esterilizar el lazo de siembra flameándolo en la llama hasta que se ponga al rojo vivo y luego mantenerlo cerca del mechero.
- Siempre cerca de la llama, destapar el vial o recipiente que contenga la muestra de levadura y flamear la boca del mismo.
- Tocar suavemente la pared interior del recipiente para enfriar el lazo de siembra
- Tomar una muestra de levadura apenas tocando el contenido.
- Retirar el lazo y mantenerlo cerca de la llama (no tan cerca para quemar la muestra).
- Flamear la boca del vial nuevamente y tapar.
- Tomar la placa ahora con el agar hacia arriba y levantar la tapa solo lo suficiente para poder realizar la siembra.
- Suavemente deslizar el extremo del lazo en forma de zigzag en un extremo de la placa.
- Tapar la placa y dejarla boca abajo nuevamente.
- Esterilizar nuevamente el lazo de siembra.
- Tomar la paca nuevamente y realizar un nuevo trazo en zigzag empezando desde el anterior.
La idea es ir "estirando" las células de forma que crezcan colonias separadas. Este proceso se repite normalmente 3 veces, quedando un dibujo como el siguiente:
- Dejar reposar 2 o 3 días a temperatura ambiente para que crezcan las colonias.
Pasados 2 o 3 días vamos a ver las colonias crecidas y listas para inocular mosto. Nos interesan las colonias de tamaño medio, bien circulares con contorno bien definido y de color blanco mate. (Colonias traslúcidas o amarillentas son bacterias, blanco brillante con estructura de cristales son hongos o moho)
- Sellar con papel film o cinta aislante y almacenar en la heladera para detener (ralentizar en realidad) el crecimiento de las colonias.
Ejemplo de siembra:
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