Preparar placas para cultivo

En este post voy a explicar como preparo las placas de petri para cultivo de levadura. Este es el método que me viene dando buen resultado.

Elementos necesarios:

• Placas de petri
• Olla a presión
• Recipiente para preparar el medio de cultivo (uso erlenmeyer de 1L)
• Agar en polvo. Yo compro en una distribuidora para laboratorios, pero en las dietéticas también lo venden.
• Wort con densidad 1.040
• Film transparente para sellar las placas de petri

Los pasos serían:

1. Preparar el medio de cultivo y dejarlo enfriar
2. Esterilizar las placas de petri y dejarlas enfriar
3. Verter el medio de cultivo en las placas de petri y dejarlas secar
4. Sellar las placas de petri y guardarlas en la heladera hasta su uso

*Los pasos 1 y 2 se pueden realizar en paralelo

Lo primero que hago es preparar el medio de cultivo: Uso 1 litro de wort 1.1040  hecho solo con malta base, sin lúpulo y agregando servomyces. Caliento el wort hasta que rompe hervor luego lo saco del fuego.

Wort descanzando luego de hervido

Peso 15 gramos de agar en polvo y lo voy espolvoreando sobre el wort suavemente tratando de que no se formen cúmulos grandes en la superficie.  

Pesando el agar en polvo

Dejo hidratar el agar unos minutos hasta que todo ha tomado contacto con el wort. Luego agito suavemente hasta mezcla todo el agar.
El siguiente paso es poner la mezcla nuevamente al fuego hasta que rompa hervor, siempre cuidando que no se vuelque (ojo que sube rápidamente la espuma). Regulo el calor moviendo la preparación del fuego para mantener un hervor suave pero constante por unos minutos hasta que se disuelva completamente el agar. Despues lo dejo enfriar hasta 40°C aproximadamente. Esto es justo antes de que solidifique el agar (37°C) y tarda casi una hora.

Hirviendo el wort con agar

Mientras realizo lo anterior, lavo y esterilizo las placas de petri: Utilizando una esponja que tengo solo para estas cosas y detergente neutro, lavo bien las placas de petri y trato de escurrir la mayor cantidad de agua posible. Luego las pongo cerradas (no selladas) dentro de la olla a presión sobre un falso fondo con un par de centímetros de agua. Cuando comienza a escapar vapor por la válvula de seguridad comienzo a contar 20 minutos para esterilizar las placas (5' establecimiento de temp + 10' de mantenimiento + 5' seguridad). La temperatura que alcanza adentro ronda los 120°C.
Luego saco las cajas de la olla y las dejo enfriarse.

Cuando las placas están ya a temperatura ambiente y el agar alrededor de 40°C (aún líquido y se siente caliente en la mano pero confortable) entonces es momento de llenar las placas!

Pongo todas las placas una al lado de la otra con la tapa hacia arriba y una a una voy llenándolas. Con una mano tomo el erlenmeyer con el agar y con la otra apenas destapo la caja lo suficiente para poder echar el líquido adentro. Vierto hasta obtener medio centímetro de medio en cada placa. En youtube hay muchos videos mostrando este procedimiento.

Recién vertido el medio y esperando que solidifique

Una vez llenas las placas las apilo y espero a que se solidifique el agar. Luego las invierto, quedando el medio de cultivo arriba, y las dejo en un lugar cálido y limpio hasta que se evapora toda la condensación del interior. Esto puede tomar 2 o 3 días.

Placas evaporando la condensación interior

Este tiempo también sirve para verificar que no se hayan contaminado las placas. Si luego de estos 3 días a temperatura ambiente se forma moho, hongos o crecen colonias de lo que sea, entonces hay que descartar las placas contaminadas.

Para evitar que se reseque el medio de cultivo y se pueda contaminar, sello las cajas utilizando film transparente. Luego las pongo en bolsa ziploc y guardo en la heladera hasta que las necesito.

Placa sellada con film transparente en los bordes.

Film transparente. Corto el rollo en secciones de 5cm para este fin.

Ver El banco de Levaduras.